《2018年第六屆上海國(guó)際男科論壇 暨稀少精子手把手培訓(xùn)班》 世上無(wú)難事，只要肯登攀楓葉 <h3>2018年5月3日～6日第六屆上海國(guó)際男性健康論壇，亞洲男科學(xué)協(xié)會(huì)男性不育學(xué)術(shù)研討會(huì)順利開(kāi)幕了。參會(huì)代表人數(shù)非?；鸨?，來(lái)自臺(tái)灣，美國(guó)以及國(guó)內(nèi)的代表超出預(yù)計(jì)有五百多人吶！此次會(huì)議除了三天半日程滿滿的內(nèi)容外，還安排了四個(gè)報(bào)名火爆的手把手培訓(xùn)班。</h3> <h3>其中2018稀少/單精子冷凍手把手培訓(xùn)班隨著第六屆上海國(guó)際男性健康論壇圓滿閉幕，于2018年5月6日下午在上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院強(qiáng)勢(shì)開(kāi)班。</h3> <h3>本次培訓(xùn)班改變了以往的方式，采用先理論講課，部分講課穿插在大會(huì)的內(nèi)容中，與男科顯微取精內(nèi)容緊密銜接，會(huì)議結(jié)束再進(jìn)行為期三天的手把手培訓(xùn)。</h3> <h3>劉鋒主任首先針對(duì)不同來(lái)源的精子如何處理及規(guī)范化操作，給各位代表進(jìn)行了深入細(xì)致的講解。強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)室人員間規(guī)范操作的重要性。</h3> <h3>胡雙鋼博士，結(jié)合自己多年來(lái)的實(shí)驗(yàn)室操作經(jīng)驗(yàn)，給大家分享了他在臨床工作中如何解決凍融精子ICSI受精失敗的策略</h3> <h3>薛松果博士，將自己豐富的臨床實(shí)踐給學(xué)員們分享了各種稀少精子不同載體的凍融過(guò)程的優(yōu)缺點(diǎn)，還詳細(xì)介紹了他對(duì)單精子冷凍的體會(huì)。</h3> <h3>朱子玨博士，在單精子冷凍安全性實(shí)驗(yàn)方面做了一些摸索，本次會(huì)議上把自己的研究結(jié)果給各位學(xué)員做了分享，并強(qiáng)調(diào)了單精子冷凍操作中應(yīng)該注意的問(wèn)題。</h3> <h3>胡劍麟博士，將自己在德國(guó)科隆大學(xué)交流了解到的玻璃化冷凍精子的概念分享給了各位代表。還對(duì)低溫生物學(xué)的理論做了很詳細(xì)的解析</h3><h3><br /></h3> <h3>公躍華老師，針對(duì)稀少精子的凍融方法在臨床工作應(yīng)用上的結(jié)局了一個(gè)階段性總結(jié)</h3> <h3>陳威博士，介紹了他在實(shí)驗(yàn)室工作中，使用單精子凍融的精子對(duì)受精后，其卵裂，囊胚形成率，可使用胚胎率做了中肯的評(píng)價(jià)，并對(duì)目前的單精子冷凍方法做了一些改進(jìn)。</h3> <h3>來(lái)自于上海市第一人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室的張?bào)鸩ㄖ魅?，就單精子冷凍技術(shù)用于克氏綜合癥治療和基礎(chǔ)研究方面給大家做了分享。</h3> <h3>德國(guó)美天旎公司的姜博士，專(zhuān)門(mén)為大家介紹了磁珠法分選凋亡精子，可提高精子質(zhì)量獲得優(yōu)質(zhì)胚胎。</h3> <h3>理論班上最后的授課人是江蘇克勞特低溫技術(shù)有限公司創(chuàng)始人孫大明博士，以小型天然氣液化技術(shù)為例，介紹了液化天然氣（LNG）是清潔能源，但液化天然氣在生產(chǎn)、儲(chǔ)運(yùn)和使用過(guò)程中產(chǎn)生的蒸發(fā)氣（BOG）排放到大氣中所造成的危害正逐漸積累和放大。液化天然氣的BOG排放不僅造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，而且?guī)?lái)嚴(yán)重的安全環(huán)保問(wèn)題，排出的天然氣主要成分是甲烷（CH4），甲烷的溫室效應(yīng)約是等質(zhì)量二氧化碳的27倍，并且在周?chē)髿庵挟a(chǎn)生天然氣聚集，易爆易燃。斯特林制冷技術(shù)可以直接將天然氣揮發(fā)氣液化回收，特別適合解決這一問(wèn)題。 </h3> <h3>稀少精子凍融保存理論培訓(xùn)豐富而接地氣的內(nèi)容吸引了來(lái)自全國(guó)各地的學(xué)員。理論課結(jié)束后，我們接著安排了三天的稀少精子凍融手把手的操作培訓(xùn)</h3> <h3>有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，目前在男性不育人群中無(wú)精子癥的發(fā)生率約占人口總數(shù)的1%，約占男性不育癥的15%。其中非梗阻性無(wú)精子癥（NOA）約占無(wú)精子癥的60%。而部分NOA是可以發(fā)現(xiàn)睪丸殘存的局灶性生精位點(diǎn)的，這時(shí)只能通過(guò)顯微外科的手法來(lái)才能獲得精子。</h3> <h3>實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的主要任務(wù)，就是不要輕易浪費(fèi)一條可用的精子，用它與健康的卵子結(jié)合，給無(wú)精子癥患者帶來(lái)生育一個(gè)自己孩子的希望</h3> <h3>微量精子冷凍操作方法</h3><h3>將顯微手術(shù)取得的有限睪丸組織立即進(jìn)行處理，將獲得精子離心濃縮，接著加入培養(yǎng)液培養(yǎng)來(lái)提高精子的活力，讓其運(yùn)動(dòng)。最后加入稀少精子冷凍保護(hù)劑，利用超低溫(-196℃)技術(shù)冷凍在液氮中。通過(guò)微量精子冷凍的方式將這些精子凍存，待需要的時(shí)候再提取使用。</h3> <h3>李錚教授，在培訓(xùn)班開(kāi)始及培訓(xùn)期間，都會(huì)親臨課堂，給學(xué)員們講解精子的發(fā)生，以及無(wú)精子癥的臨床分類(lèi)，并反復(fù)強(qiáng)調(diào)微量精子凍存的臨床應(yīng)用意義。</h3> <h3>本次培訓(xùn)班學(xué)員，多來(lái)自全國(guó)各地生殖醫(yī)學(xué)中心，她們對(duì)胚胎實(shí)驗(yàn)室技術(shù)嫻熟，對(duì)微量精子冷凍操作細(xì)節(jié)也格外關(guān)注。</h3> <h3>三天的培訓(xùn)當(dāng)中，學(xué)員們不僅從理論課中學(xué)到了稀少精子冷凍有關(guān)知識(shí)。更重要的是每人都可以親手操作，體會(huì)操作細(xì)節(jié)。</h3> <h3>薛云婧老師在指導(dǎo)學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作</h3> <h3>通過(guò)學(xué)員們頭一天的操作實(shí)踐，復(fù)蘇結(jié)果統(tǒng)計(jì)時(shí)讓大家非常吃驚的看到，同一份樣本復(fù)蘇后的濃度和活力差別很大，為什么會(huì)出現(xiàn)這樣的結(jié)果呢？</h3> <h3>針對(duì)存在的問(wèn)題，劉鋒主任為學(xué)員們做了分析、</h3><h3>1. 過(guò)失誤差 過(guò)失誤差是一種與實(shí)際事實(shí)明顯不符的誤差，誤差值可能很大，且無(wú)一定的規(guī)律。它主要是由于實(shí)驗(yàn)人員粗心大意、操作不當(dāng)造成的，如計(jì)數(shù)不準(zhǔn)，操作失誤等。</h3><h3>2．操作誤差 操作誤差是由于不正確的實(shí)驗(yàn)操作所致。 </h3><h3>（1）取樣時(shí)沉淀的樣本未注意混勻，混勻過(guò)分或不充分，有氣泡 </h3><h3>（2）計(jì)數(shù)時(shí)樣品沉淀時(shí)間過(guò)短或過(guò)快，復(fù)蘇時(shí)沒(méi)擦凈麥管外的冰霜即丟進(jìn)水箱里等等。 </h3><h3>3．主觀誤差（個(gè)人誤差） </h3><h3>這種誤差是由分析人員本身的一些主觀因素造成的。</h3><h3>例如，培訓(xùn)時(shí)人員之間對(duì)該技術(shù)掌握的程度快慢，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的理解不同；操作時(shí)的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作未注意，人為造成冷凍復(fù)蘇操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等。</h3><h3> 經(jīng)過(guò)動(dòng)手操作和復(fù)蘇結(jié)果評(píng)價(jià)，讓學(xué)員們體會(huì)到微量精子冷凍看著簡(jiǎn)單，但要凍的好不是一件容易的事！</h3> <h3>培訓(xùn)班上我們還進(jìn)行了單精子凍融操作培訓(xùn)，薛云婧老師為大家做了冷凍操作和復(fù)蘇的演示，后來(lái)每個(gè)學(xué)員都有機(jī)會(huì)分別上機(jī)實(shí)際體驗(yàn)。有的學(xué)員操作復(fù)蘇率達(dá)到百分之百，這表明我們學(xué)員的顯微操作技術(shù)非常嫻熟。但也有學(xué)員操作復(fù)蘇后精子完全不動(dòng)的。結(jié)果說(shuō)明，細(xì)節(jié)決定成敗。</h3> <h3><br /></h3><h3>微量精子冷凍主要用于對(duì)于顯微男科獲取的精子進(jìn)行冷凍，如細(xì)針穿刺(FNA)、經(jīng)皮睪丸活檢、開(kāi)放睪丸活檢、睪丸精子獲取（TESE）、顯微睪丸速精術(shù)等等。為了讓學(xué)員們真正了解顯微取精和取精后實(shí)驗(yàn)室人員處理流程，本次培訓(xùn)還安排學(xué)員們到手術(shù)室參觀學(xué)習(xí)</h3> <h3>顯微鏡下可以清楚的看到睪丸中的曲細(xì)精管</h3> <h3>也許就在這管子里發(fā)現(xiàn)了精子呢！</h3> <h3>手術(shù)過(guò)程，實(shí)驗(yàn)室人員需要把獲得的組織盡快用生理鹽水沖洗組織上帶著的血液，減少紅細(xì)胞對(duì)觀察精子造成的影響。然后將組織用顯微外科剪刀快速剪碎，再用套管針充分抽吸，讓曲細(xì)精管中的精子完全釋放出來(lái)，再取樣置培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移倒置顯微鏡下觀察有無(wú)精子……</h3> <h3>實(shí)驗(yàn)室的同事接到標(biāo)本后，要盡快的在顯微鏡下用培養(yǎng)皿再?gòu)?fù)合一次精子的數(shù)量，然后選擇合適的載體進(jìn)行冷凍。洪艷老師為學(xué)員們演示了睪丸組織的凍存操作。</h3> <h3>目前，精子的來(lái)源涵蓋了輸精管、附睪和睪丸。需要注意的兩點(diǎn)是：（1）IVF和ICSI可能避免了許多自然受精中的自然選擇屏障，也許會(huì)把父輩導(dǎo)致不育的異常缺陷傳至后代。這是一個(gè)倫理學(xué)的大問(wèn)題，特別是如Klinefelter綜合征等X連鎖疾病，可能在其孫子輩重現(xiàn)，導(dǎo)致可治療的男性不育癥。（2）近期的資料顯示，利用該技術(shù)生育的后代，其性染色體的異常率，較自然妊娠的后代高4倍。</h3> <h3>睪丸精子沒(méi)有經(jīng)過(guò)附睪成熟變形階段，精子染色質(zhì)去濃縮及激活過(guò)程較附睪精子會(huì)有差別。這一切問(wèn)題都待我們后期研究，解決。</h3> <h3>一周培訓(xùn)班結(jié)束了，李錚教授親自給每位學(xué)員進(jìn)行了考試，頒發(fā)證書(shū)！</h3> <h3>到了分手的時(shí)候，短短幾天的學(xué)習(xí)讓大家結(jié)下了不解之緣，紛紛留下微信和電話，表示今后工作中要加強(qiáng)聯(lián)系，多寫(xiě)美篇。</h3> <h3> 人生最精彩的不是成功的瞬間，而是堅(jiān)持的每一個(gè)過(guò)程?！ ?lt;/h3><h3> 成功沒(méi)有捷徑，上海交通大學(xué)第一人民醫(yī)院男科李錚教授團(tuán)隊(duì)的每一位醫(yī)生，研究生，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員在日常繁忙的臨床工作中，潛心研究，不斷改良，在經(jīng)歷過(guò)無(wú)數(shù)次失敗后，不斷改進(jìn)摸索稀少精子和單精子冷凍方法，包括精子冷凍前的評(píng)估，冷凍載體的選擇，冷凍方案的制定，精子專(zhuān)用培養(yǎng)液，精子冷凍保護(hù)劑，精子冷凍載體，冷凍降溫方法和速率，精子復(fù)蘇方法，復(fù)蘇時(shí)間以及精子體外培養(yǎng)方法等，最終建立了一套自己完整的體系及操作技術(shù)流程，為不斷提高稀少/單精子冷凍的復(fù)蘇率在男科領(lǐng)域提供了科學(xué)的理論依據(jù)和技術(shù)操作方法。</h3><h3>盡管我們的工作還存在著各種問(wèn)題，但世上無(wú)難事 只怕有心人！相信未來(lái)會(huì)做得更好??！</h3> <p>我是劉鋒，生殖醫(yī)學(xué)主任技師。熱愛(ài)生殖醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作，從事本專(zhuān)業(yè)技術(shù)已29年。愿意與各位同道交流，并歡迎各位親們給予關(guān)注</p>