<h1 style="text-align: center;"><b style="color: rgb(237, 35, 8); font-size: 22px;">演講嘉賓</b></h1><h1 style="text-align: center;"><br></h1><h1 style="text-align: center;"><b style="color: rgb(237, 35, 8); font-size: 22px;">安 庚 副教授</b></h1><h1 style="text-align: center;"><br></h1><p class="ql-block" style="text-align: center;">生殖醫(yī)學中心副主任</p><p class="ql-block" style="text-align: center;">男科主任</p><p class="ql-block" style="text-align: center;">廣州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院</p><p class="ql-block"><br></p> <h5><i><font color="#b06fbb">（溫馨提示：在文章結(jié)尾處，歡迎關(guān)注和觀看安庚教授本次演講的精彩視頻）</font></i></h5> <h1 style="text-align: center;"><b><font color="#167efb">單中心非梗阻性無精子癥：從基礎(chǔ)理論研究到臨床診療的回顧與展望</font></b></h1> 人類生殖醫(yī)學是目前研究的熱點方向之一。從精子與卵子的受精到形成胚胎以及到胚胎發(fā)育的整個過程，從生殖嵴的分化到睪丸發(fā)育，從原始生殖細胞到成熟的精子，再到與卵子的受精形成一個循環(huán)的過程，這也是生命形成的整個過程，其中每一個環(huán)節(jié)都有可能成為我們的研究方向。<div><br></div><div>安庚教授團隊主要針對原始生殖細胞增殖及向精子分化過程開展了一系列研究工作。<font color="#167efb">將從以下四個方面展開論述：</font><div><ul><li>單細胞測序與精子發(fā)生相關(guān)研究；</li><li>性激素調(diào)控與內(nèi)分泌治療方案；</li><li>睪丸顯微取精ICSI數(shù)據(jù)集隨訪；</li><li>睪丸組織培養(yǎng)及展望。</li></ul></div></div> <h5 style="text-align: center">從精子發(fā)生到睪丸發(fā)育</h5> <div style="text-align: center;"><b><font color="#167efb">單細胞測序與精子發(fā)生相關(guān)研究</font></b></div><div style="text-align: center;"><b><font color="#167efb"><br></font></b></div><font color="#167efb">1.精子發(fā)生</font><br> 精子發(fā)生的過程是從原始生殖細胞、精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞到精子，在這個過程中需要經(jīng)過兩次的減數(shù)分裂。在精子發(fā)生的過程中需要生精微環(huán)境，包括生殖細胞，間質(zhì)細胞(Leydig cells)和支持細胞(Sertoli cells)等。 <h5 style="text-align: center">精子發(fā)生的過程</h5> 人類精子發(fā)生可分為三個階段，首先是減數(shù)分裂前期、減數(shù)分裂期、減數(shù)分裂后期（包括減數(shù)分裂后期精子的成熟）。在減數(shù)分裂前期主要涉及精原細胞分化的過程以及精原細胞在進入減數(shù)分裂期前完成最后一輪的DNA復制。減數(shù)分裂期可細分為細線期、偶線期、粗線期和雙線期，在此過程中包括了同源染色體的排列、減數(shù)分裂重組以及交叉形成、精母細胞通過兩個連續(xù)的減數(shù)分裂形成單倍體的精子細胞，這是精子發(fā)生過程最為復雜的階段。臨床上觀察到的非梗阻性無精子癥患者的生精過程多數(shù)停滯于減數(shù)分裂前期和減數(shù)分裂期。在減數(shù)分裂后期階段圓形精子細胞還需發(fā)生廣泛的形態(tài)學變化，包括染色質(zhì)壓實、細胞質(zhì)和細胞器的重組、鞭毛的發(fā)育到最終形成成熟的精子。 <h5 style="text-align: center;"><font color="#333333">人類精子發(fā)生的三個階段</font></h5> <font color="#167efb">2. 研究與突破</font><br> 隨著對人類精子發(fā)生過程以及動物實驗的深入研究，我們目前可對精子發(fā)生階段的Marker基因進行標記，可做到相對精準的定位，但是由于動物的精子發(fā)生與人類精子發(fā)生還存在諸多區(qū)別，使得我們尚不能全面了解人類精子發(fā)生的過程?；谶@個局限性，2018年安庚教授團隊聯(lián)合喬杰院士、趙小陽教授完成了對男性人類精子發(fā)生整個過程的單細胞測序工作，闡明了人類精子發(fā)生過程中的細胞命運轉(zhuǎn)變和標記基因的動態(tài)變化，研究結(jié)題提示三種精原細胞亞型、七種精母細胞亞型和四種精子細胞亞型。 <h5 style="text-align: center;">人類精子發(fā)生過程的單細胞測序圖譜</h5> 2020年，安庚教授聯(lián)合南通大學醫(yī)學院院長孫斐教授進一步對健康人、梗阻性無精子癥以及非梗阻性無精子癥睪丸組織進行單細胞測序，發(fā)現(xiàn)梗阻性無精子癥患者睪丸細胞亞型與健康人相同，其睪丸精子比例明顯降低，早期初級精母細胞比例明顯升高，這說明梗阻性無精子癥患者的精子發(fā)生功能受損；此外，研究表明非梗阻性無精子癥的支持細胞與梗阻性無精子癥的支持細胞基因表達存在一定差異性。 <h5 style="text-align: center;">健康人、梗阻性無精子癥以及非梗阻性無精子癥睪丸組織的單細胞測序</h5> 目前，安庚教授團隊在上述兩項研究的基礎(chǔ)上，正進一步針對非梗阻性無精子癥的病因進行深入研究，鑒別出不同類型的非梗阻性無精子癥所關(guān)聯(lián)的表型，描繪出非梗阻性無精子癥相較于正常睪丸組織存在的基因突變圖譜。這部分結(jié)果正在數(shù)據(jù)整理階段。 <h5 style="text-align: center;">不同類型的非梗阻性無精子癥的單細胞測序</h5> <div style="text-align: center;"><b><font color="#167efb">性激素調(diào)控與內(nèi)分泌治療方案</font></b></div><div style="text-align: center;"><b><br></b></div><font color="#167efb">1. 男性生殖內(nèi)分泌</font><br> 精子發(fā)生的過程離不開性激素的調(diào)控。女性生殖內(nèi)分泌學的基礎(chǔ)是兩促性腺激素兩細胞學說；男性生殖內(nèi)分泌學的針對下丘腦-垂體-睪丸性腺軸的研究同樣較為完備，但是對于在臨床中利用內(nèi)分泌對促進精子發(fā)生的治療方面仍有許多工作需要完善。<div><br> 安庚教授簡單介紹了激素是如何在精子發(fā)生過程中發(fā)揮調(diào)控作用的。卵泡刺激素(FSH)的主要作用是增加精原細胞和減數(shù)分裂前精母細胞的數(shù)量、參與減數(shù)分裂啟動和維持生殖細胞的數(shù)量、刺激精原細胞和前細線期精母細胞的有絲分裂和減數(shù)分裂。黃體生成素(LH)可刺激睪酮的產(chǎn)生，對于精子發(fā)生必不可少，這可在動物實驗中觀察到的敲除LH受體后導致無精子癥得以印證。睪酮(T)的作用包括參與完成減數(shù)分裂、促進長頭精子Steroli cell的粘附、促進精子的釋放、維持血睪屏障(BTB)。而睪丸內(nèi)睪酮(ITT)是激素調(diào)控精子發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其濃度是循環(huán)系統(tǒng)中睪酮濃度的100-1000倍，參與構(gòu)成了睪丸內(nèi)生精微環(huán)境，并且參與了精原細胞A型向B型的轉(zhuǎn)化。激素調(diào)控精子發(fā)生的深入闡述可為我們進一步對內(nèi)分泌治療促進精子發(fā)生以及體外睪丸組織培養(yǎng)提供更為深厚的理論依據(jù)。</div> <h5 style="text-align: center">激素調(diào)控精子發(fā)生</h5> <font color="#167efb">2. 內(nèi)分泌治療非梗阻性無精子癥的方案</font><br> 2013年Hussein等通過術(shù)前進行包括克羅米芬、hCG和hMG在內(nèi)的激素預處理，希望提高顯微取精的獲精率，其結(jié)果提示496例接受上述內(nèi)分泌治療預處理的患者的獲精率較116例選擇直接進行顯微取精手術(shù)的獲精率高（61.7% vs 33.6%）。而日本學者Shiraishi等人提出利用hCG、FSH促進精子發(fā)生來提高二次顯微手術(shù)取精的成功率。安庚教授團隊根據(jù)現(xiàn)有的治療方案基礎(chǔ)上提出改良方案并進行臨床數(shù)據(jù)分享。 <h5 style="text-align: center;">內(nèi)分泌治療方案</h5> 安庚教授團隊針對高促型NOA推薦的治療方案是hCG序貫治療方案，首先采用hCG進行預處理，根據(jù)患者對hCG的反應性來判斷睪丸儲備功能，并根據(jù)FSH和T的水平變化，后續(xù)是否加用FSH、hMG等，抑或是繼續(xù)延續(xù)hCG治療。2020年安庚教授在Fertility and Sterility發(fā)表了關(guān)于hCG在非嵌合型克氏綜合征中的應用及其ICSI結(jié)局的成果，提出非嵌合型克氏綜合征患者接受hCG治療的睪酮反應可能預測micro-TESE的手術(shù)結(jié)局。安庚教授表示該工作得到了康奈爾大學李石華教授的支持和指導。<div><br>安庚教授團隊隨后對2015年至2019年就診的NOA患者（除外克氏綜合征）內(nèi)分泌治療的數(shù)據(jù)進行總結(jié)和分析，通過傾向性評分逆概率加權(quán)并調(diào)整混雜后提示促性腺激素治療對顯微手術(shù)取精有積極影響。目前數(shù)據(jù)整理并擬投稿Fertility and Sterility雜志。</div> <h5 style="text-align: center">非嵌合型克氏綜合征患者接受hCG治療的睪酮反應可能預測micro-TESE的手術(shù)結(jié)局</h5> <h3 style="text-align: center"><b><font color="#167efb">睪丸顯微取精ICSI數(shù)據(jù)及隨訪</font></b></h3><h3 style="text-align: center"><br><div style="text-align: left;"><span style="color: inherit;">安庚教授團隊建立了術(shù)中冰凍快速病理技術(shù)。通過術(shù)中快速病理可短時間內(nèi)對睪丸組織病理進行診斷，有助于明確睪丸組織的組織成分、有利于標本進入生物樣本庫以及后續(xù)開展睪丸組織體外培養(yǎng)。</span></div><div style="text-align: left;"><span style="color: inherit;"><br></span></div><div style="text-align: left;"><span style="color: inherit;">安庚教授團隊對2015年至2019年就診的968例接受micro-TESE的NOA患者的ICSI結(jié)局進行了隨訪，分析了不同病因NOA的ICSI結(jié)局、不同冷凍精子數(shù)量的ICSI結(jié)局、新鮮精子與冷凍精子的ICSI結(jié)局以及隨訪新生兒數(shù)據(jù)。該文章已投稿Fertility and Sterility，目前處于修稿階段。</span></div></h3> <h5 style="text-align: center;">接受micro-TESE的NOA患者的ICSI結(jié)局隨訪數(shù)據(jù)</h5> <div style="text-align: center;"><b><font color="#167efb">睪丸組織的培養(yǎng)及展望</font></b></div><div style="text-align: center;"><b><font color="#167efb"><br></font></b></div>睪丸組織的培養(yǎng)和分化是世界性的難題。早在2014年Nature Communications發(fā)表了一篇突破性的文章，提示冷凍睪丸組織可在體外完成培育并實現(xiàn)子代生育；2019年Science的一篇文章證實可通過睪丸組織的自體移植生育子代。并對體外2D和3D培養(yǎng)體系的現(xiàn)狀進行了分享。<div><br> 安庚教授團隊2020年利用3D打印技術(shù)實現(xiàn)了全球首例“3D打印海綿體支架”修復陰莖缺損并使其恢復生殖功能生育子代，從而為建立3D培養(yǎng)體系奠定了基礎(chǔ)，以期后續(xù)利用3D技術(shù)構(gòu)建睪丸組織體外培養(yǎng)體系，實現(xiàn)精子發(fā)生的體外研究以及進行生育力保存。團隊相關(guān)工作仍在進行中，目前正在進行利用水凝膠3D打印構(gòu)建曲細精管的前期工作，下一步尚需利用微流控技術(shù)解決細胞接種的問題。</div> <h1 style="text-align: center;"><b style=""><font color="#ed2308">總 結(jié)</font></b></h1><div><font color="#167efb"><br></font></div><ul><li><font color="#167efb">單細胞測序分析作為一種研究工具對NOA的病因?qū)W研究具有重要意義。</font></li><li><font color="#167efb">NOA患者術(shù)前內(nèi)分泌治療對SRR及ICSI結(jié)局具有積極影響，患者可從中獲益。</font></li><li><font color="#167efb">冷凍睪丸組織與新鮮取精相比較的ICSI結(jié)局無顯著性差異。</font></li><li><font color="#167efb">睪丸組織的體外培養(yǎng)和自體移植具有重要的研究價值。</font></li></ul> <b>精彩專題報告結(jié)束后，康中論壇的各位專家就上述話題展開了深入和激烈的討論。</b> <h3 style="text-align: center"><font color="#b06fbb">安庚教授本次演講視頻</font></h3> <h1 style="text-align: center;"><b style="color: rgb(237, 35, 8); font-size: 15px;">2021年第2期-Ⅱ（總第12期）資料整理</b></h1><h1 style="text-align: center;"><b style="color: rgb(237, 35, 8); font-size: 15px;">安 庚 潘 峰</b></h1><h1 style="text-align: center;"><br></h1><h1 style="text-align: center;"><b style="color: rgb(237, 35, 8); font-size: 15px;">?本期視頻錄制、編輯</b></h1><h1 style="text-align: center;"><b style="color: rgb(237, 35, 8); font-size: 15px;">周 梁 潘 峰 李石華</b></h1><h1 style="text-align: center;"><br></h1><h1 style="text-align: center;"><b style="color: rgb(237, 35, 8); font-size: 15px;">2021年第2期-Ⅱ主審校</b></h1><h1 style="text-align: center;"><b style="color: rgb(237, 35, 8); font-size: 15px;">潘 峰 周任遠 田 龍 李石華</b></h1><p class="ql-block"><br></p> <h1><div style="text-align: center;"><span style="color: rgb(237, 35, 8);"><b>Care · Discover · Teach</b></span></div><font color="#ed2308"><b><div style="text-align: center;"><br></div><div style="text-align: center;">關(guān)愛 · 探索 · 教導</div><div style="text-align: center;"><br></div><div style="text-align: center;"><br></div></b></font></h1>